细胞状态正常为何不贴壁？或许是耗材出了问题 | 上海富衡

1、未经过TC（Tissue Culture-treated）处理的普通塑料耗材

普通塑料（如聚苯乙烯）表面为疏水性，贴壁细胞（如上皮细胞、成纤维细胞）的黏附分子（整合素等）无法有效结合疏水表面，导致细胞悬浮或贴壁率极低。

有时候忙起来会误将“通用塑料培养皿”（如细菌培养用）当作细胞培养耗材，或为节省经费使用未标注“TC-treated”的低价耗材。

2、低吸附/超低吸附表面耗材

此类耗材（如Corning Ultra-Low Attachment、Greiner Bio-One低吸附板）表面经亲水性改性或涂覆水凝胶层，专门抑制细胞贴壁，用于悬浮细胞培养（如杂交瘤细胞、干细胞球体）或避免细胞外基质沉积。

若误将贴壁细胞（如HeLa、MCF-7）接种于低吸附板，会导致细胞无法贴壁，呈圆球状悬浮。

3、疏水或硅化处理的耗材

部分特殊用途耗材（如细胞刮片、注射器）表面经硅化处理以减少液体残留，但此类表面完全疏水，绝对不适合贴壁细胞培养。

1、玻璃材质培养器皿

普通玻璃表面亲水性低于TC处理的塑料，且缺乏细胞黏附所需的化学基团（如羟基、羧基），除特定细胞（如原代巨噬细胞、部分干细胞）外，多数细胞贴壁效率低。

其中有一部分经特殊改性的玻璃（如表面氨基化）可用于特定实验，但是非常规选择。

2、非聚苯乙烯材质的耗材（如聚丙烯、聚乙烯）

聚丙烯（PP）、聚乙烯（PE）等材质疏水性强且硬度高，无法通过常规TC处理有效改善亲水性，仅适用于悬浮细胞或储存液体，不可用于贴壁细胞培养。

劣质耗材在生产时可能残留脱模剂（如硅油）或清洁不彻底，导致表面化学性质改变，细胞无法黏附。

例如同一批次耗材中部分培养板贴壁正常，部分异常，显微镜下可见细胞呈圆形漂浮，培养基无浑浊（排除污染）。

耗材储存不当（如高温、潮湿环境）或过期，导致表面亲水性涂层降解；反复使用的耗材（如重复灭菌的玻璃皿）经多次酸碱处理后表面改性层被破坏。

例如使用过期1年以上的TC板，细胞贴壁率会从正常90%左右降至＜50%左右。

重复使用的培养瓶（如手工刷洗后的玻璃瓶）表面产生细微划痕，形成疏水区域，细胞在划痕处无法贴壁，仅在光滑区域黏附。

用于细胞冻存的冻存管、离心管通常内壁光滑或有防黏涂层，若误将细胞直接接种于此类容器（如用50mL离心管培养贴壁细胞），会导致完全不贴壁。

虽然包被ECM（如胶原、纤连蛋白）可促进贴壁，但若未包被或包被浓度不足（如胶原＜1 μg/cm²），反而导致贴壁失败。

然而不是所有贴壁细胞都需要基质包被，TC处理后耗材已满足多数细胞的贴壁需求（如HeLa细胞无需额外包被）。

通过以上分析，可快速定位耗材是否为细胞不贴壁的主因，避免因耗材选择错误导致实验失败。