蛋白质样品制备

实验目的：Western blot、质谱（MS）分析前的蛋白质消化。

典型酶例：胰蛋白酶（Trypsin）、糜蛋白酶（Chymotrypsin）。

原理：

注意：需控制酶与底物比例（如 1:50），反应后需用抑制剂（如 PMSF）终止反应，避免过度消化。

贴壁细胞消化传代

实验目的：将贴壁生长的细胞（如 HeLa、293T）从培养瓶底解离，用于传代或细胞计数。

使用方法：

注意：过度消化会导致细胞皱缩、凋亡，原代细胞对胰酶更敏感，需降低浓度（0.125%）或缩短时间。

组织块的初步解离

实验目的：配合机械研磨处理动物组织（如肝脏、肾脏），获得单细胞悬液。

局限性：胰酶对细胞外基质（ECM）中的胶原蛋白降解能力弱，单独使用时解离效率低，常需与胶原酶联用。

I型胶原酶消化液（货号：FH110-002）

原代组织细胞的高效解离

适用组织：富含胶原蛋白的组织（如皮肤、肌腱、软骨、肿瘤组织）。

作用机制：特异性切割胶原蛋白 α 链中的 Gly-Pro/Leu 序列，破坏胶原纤维网络，释放包裹的细胞（如成纤维细胞、软骨细胞、肿瘤细胞）。

酶类型选择：

实验流程示例：

a.组织剪碎后，用 0.1-0.3 mg/mL 胶原酶（含 Ca²⁺缓冲液）37℃振荡消化 1-4 小时；

b.过滤去除未消化组织块，离心收集细胞（无需血清终止，直接洗涤）。

细胞外基质（ECM）研究

实验目的：降解胶原凝胶（如 Matrigel）以回收细胞，或制备胶原降解产物用于机制研究。

细胞传代

优先选胰酶（含 EDTA），适用于已建系的贴壁细胞（如细胞系），操作简单、成本低。

原代组织解离”

蛋白质分析

胰酶使用：

胶原酶使用：

蛋白酶使用：