细胞污染类型及处理指南
1. 常见污染类型及特征
2. 污染处理与预防措施
细菌 / 真菌污染:
建议直接丢弃污染细胞,避免扩散;
彻底消杀培养箱和细胞房(使用富恒的培养箱除菌剂、水盘抑菌剂等)。
支原体 / 黑胶虫污染:
若细胞珍贵,可尝试对应清除剂(如富恒支原体清除剂、黑胶虫清除剂);
支原体污染需注意操作规范(戴口罩、避免皮肤裸露),黑胶虫污染需排查血清来源。
预防核心:
定期清洁培养箱(每周用酒精擦拭,更换水盘抑菌剂);
规范操作(超净台分区、避免长时间敞口、冻存细胞需慢冻速溶)。
细胞培养常见问题及解答
1. 悬浮细胞问题(如 THP-1)
碎片多、活力低:
原因:吹打过度、离心转速过高(建议 800-1000 转 / 分钟)。
解决:低速离心,避免用力吹打;可自然沉降 1-2 小时,吸上清换液。
2. 细胞不贴壁
可能原因:培养皿未做 TC 处理、细胞状态差、消化过度。
建议:使用 TC 处理培养皿,复苏后静置 2 天观察;调整消化时间(避免过长)。
3. 细胞聚团(如 SH-SY5Y、293)
原因:消化不充分或过度、吹打力度过大、细胞密度过高。
解决:
控制消化时间(根据细胞特性调整,避免过度刺激);
轻柔吹打,传代时密度不宜过高(建议 80% 汇合度时传代);
聚团严重时,可自然沉降后取上清重新铺板。
4. 冻存与复苏问题
常见错误:直接将冻存管放入液氮(未经 - 80℃过渡),导致细胞骤冷死亡。
正确流程:4℃预冷→-80℃过夜→转入液氮;复苏时 37℃水浴快速解冻,避免反复冻融。
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