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上海富衡 | 富衡生物7月24日校园实验室内细胞培养常见问题直播总结

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细胞污染类型及处理指南

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1. 常见污染类型及特征

污染类型特征检测方法
细菌污染
培养基浑浊,肉眼可见悬浮物,显微镜下有游动的小黑点(球菌 / 杆菌)。
肉眼观察 + 显微镜检查
真菌污染
培养基不浑浊,但有白色 / 灰色菌丝团,后期肉眼可见大团附着。
肉眼观察
支原体污染
细胞生长缓慢、形态异常(空泡多),无明显肉眼变化。
QPCR 或显色试剂盒检测
黑胶虫污染
显微镜下可见高速游动的小黑点,常伴随细胞活力下降。
显微镜观察(需排除液体晃动干扰)


2. 污染处理与预防措施

细菌 / 真菌污染:

  • 建议直接丢弃污染细胞,避免扩散;

  • 彻底消杀培养箱和细胞房(使用富恒的培养箱除菌剂、水盘抑菌剂等)。

支原体 / 黑胶虫污染:

  • 若细胞珍贵,可尝试对应清除剂(如富恒支原体清除剂、黑胶虫清除剂);

  • 支原体污染需注意操作规范(戴口罩、避免皮肤裸露),黑胶虫污染需排查血清来源。

预防核心:

  • 定期清洁培养箱(每周用酒精擦拭,更换水盘抑菌剂);

  • 规范操作(超净台分区、避免长时间敞口、冻存细胞需慢冻速溶)。





细胞培养常见问题及解答


1. 悬浮细胞问题(如 THP-1)

碎片多、活力低:

  • 原因:吹打过度、离心转速过高(建议 800-1000 转 / 分钟)。

  • 解决:低速离心,避免用力吹打;可自然沉降 1-2 小时,吸上清换液。


2. 细胞不贴壁

  • 可能原因:培养皿未做 TC 处理、细胞状态差、消化过度。

  • 建议:使用 TC 处理培养皿,复苏后静置 2 天观察;调整消化时间(避免过长)。


3. 细胞聚团(如 SH-SY5Y、293)

原因:消化不充分或过度、吹打力度过大、细胞密度过高

解决:

  • 控制消化时间(根据细胞特性调整,避免过度刺激);

  • 轻柔吹打,传代时密度不宜过高(建议 80% 汇合度时传代);

  • 聚团严重时,可自然沉降后取上清重新铺板。


4. 冻存与复苏问题

  • 常见错误:直接将冻存管放入液氮(未经 - 80℃过渡),导致细胞骤冷死亡。

  • 正确流程:4℃预冷→-80℃过夜→转入液氮;复苏时 37℃水浴快速解冻,避免反复冻融。







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