在细胞培养的道路上，遇到细胞聚团问题总是让人头疼不已。作为一位拥有十年细胞培养经验的“老司机”,今天就来和大家聊聊细胞聚团 那些事，分享如何分析原因并有效解决这个问题。

细胞聚团不仅仅是形态上的变化，它会严重影响细胞的正常生长、代谢功能及实验结果的准确性。

聚团会导致细胞间营养和氧气交换受限，部分细胞因养分不足无法正常生长分裂。聚团细胞的生长状态往往不均匀，有的增殖旺盛，有的则处于休眠或濒死状态。细胞在聚团后常失去正常粘附状态，影响其功能表现，如分泌能力和代谢活性。在需要细胞与基质或其他细胞 相互作用的实验中，聚团会干扰这些生物学过程。

聚团还可能导致细胞行为不一致，影响实验结果的可重复性。在药物筛选或功能研究中，聚团可能改变细胞对药物的反应，产生假阳性或假阴性结果。

1.细胞自身特性：有些细胞天生就爱“抱团“

有些细胞由于其自身生长特性，本身就倾向于聚团生长。例如，NK92细胞正常生长时就会自然以聚大团的形式悬浮生长，而U2932细胞则常以单个或簇状（即聚成小团）的形式生长。

应对策略：对于这类细胞，建议先查阅权威数据库中的细胞正常生长图片，了解其易聚团特性，无需过度处理。

2、消化不当：过度或不足都不可取

消化过程是导致细胞聚团的重要因素。消化过度(浓度过高或时间过长)会损伤细胞，影响其正常粘附能力；消化不足则会使细胞大片脱落，细胞间粘附仍然较强，难以分散成单细胞悬液。

应对策略：需要精准掌控消化时间，既要保证细胞充分解离，又要避免影响细胞状态。对于已聚团且状态良好的细胞，可进行消化处理以 获得单细胞悬液并重新接种。

3、血清影响：批次差异不容小觑

不同品牌和批次的血清在成分上存在差异，尤其是生长因子的含量，这可能会对细胞粘附能力和生长状态产生影响，引发聚团。

应对策略：培养对血清敏感的细胞时，应尽量避免更换血清品牌和生产批次。如必须更换，建议采取逐步替换的方式。

4、培养条件：环境不稳定促使细胞“抱团取暖”

培养箱温度、湿度和CO₂浓度不稳定会影响细胞正常代谢和生理功能，细胞为抵御不良环境而聚团。高密度培养时，细胞也容易出现聚团生长 。

应对策略 ：定期校准培养箱监测装置，确保环境稳定。通过预实验确定细胞最佳接种密度，避免过高密度，并及时传代。

5、其他原因：多种因素需考虑

离心速度过大或时间过长也容易造成细胞抱团。细胞状态不好、老化(如换液不及时、长得太满才传代、污染等)可能出现抱团。污染：某些细菌和真菌病原体会导致细胞溶解，结块通常是细胞培养物被污染的迹象。

1、化学分散法：添加剂来帮忙

对于无血清悬浮培养的细胞株(如HEK 293F和CHO-S)，在高密度培养时容易出现聚团。可在培养基中添加适当的抗细胞结团剂，能有效改善聚团情况。

低分子量葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium salt,DSS)可通过改变细胞表面电荷，促使单个细胞悬浮，防止结团。对于CHO细胞，推荐浓度为10-50mg/L。

DNA酶I:可添加到培养基中，分解从破裂细胞中释放的DNA,减少因DNA缠绕导致的细胞团块。但需注意使用量，过多可能导致细胞突变。

2、操作优化法：细节决定成败

3、物理分散法：机械手段解难题

对于已形成的细胞团，可尝试温和机械方法分散，如用移液器轻轻吹打聚团部位。对于较紧密的聚团，可使用低浓度胰或其他解离酶 (如胶原酶)短时间处理。让细胞静置片刻，然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。

大鼠背根神经元细胞在常温运输过程中可能因刺激导致细胞聚团漂浮。处理方法是收集聚团细胞，用胰酶消化后重新铺板。经过24小时培养，细胞开始贴壁，形态逐渐伸展，继续培养2天后，细胞形态恢复正常。

• 声悬浮技术：法国研究人员开发了一种多陷波声波悬浮技术，已成功使间充质干细胞保持悬浮状态长达24小时。在培养过程中， MSC自发地从细胞片自组织为细胞团簇。

• 微腔阵列技术：研究者开发了一种基于微工程水凝胶薄膜的高通量类器官培养技术，能够在传统多孔板底部生成微腔阵列，从而在无固体 基质条件下同时培养数千个均匀的类器官。

细胞聚团是细胞培养中的常见问题，但并非不可解决。关键在于仔细观察、分析原因并采取针对性措施。作为有十一年经验的细胞培养人，我建议大家：

文献参考：

1.Jeger-Madiot N,Arakelian L,Setterblad N, et al. Self-organization and culture of Mesenchymal Stem Cell spheroids in acoustic levitation. Sci Rep.2021;11(1):8355. doi:10.1038/ s41598-021-87459-6.

2.Freshney,R.I.《动物细胞培养——基本技术和特殊应用指南》.科学出版社，2019.