结直肠癌是全球第三大常见恶性肿瘤，约占所有癌症病例的10.2%，死亡率达9.2%。淋巴结转移状态是评估结直肠癌预后的关键因素，早期评估淋巴结状态对于预后判断和治疗决策至关重要。尽管淋巴结阴性结直肠癌通常预后较好，但患者间仍存在明显的临床异质性——部分患者会出现复发。传统的TNM分期系统在同一分期患者中无法准确预测生存差异，这表明需要更精细的分类系统来指导个性化治疗。

研究团队运用机器学习算法，对244个LNM-negative CRC样本（来自TCGA数据库）进行了深入分析，并在另外458个样本（来自GEO数据库）中进行了验证。通过非负矩阵分解（NMF）聚类方法，研究人员成功识别出两个不同的免疫亚型：C1和C2。

研究发现，这两个亚型在预后、免疫特征和基因组突变方面存在显著差异。C1亚型表现出高免疫评分和对免疫检查点阻断治疗的良好反应性；而C2亚型则显示出更好的预后和增加的免疫细胞浸润，可能代表更早期的CRC阶段。

在实验验证部分，研究团队使用了Fuheng Biotechnology (Shanghai, China)提供的结肠癌细胞系进行功能验证：

SW480 (FH0022)

HCT-116 (FH0027)

这些细胞系在探究PPFIA4基因功能中发挥了关键作用。研究人员通过siRNA转染技术敲低PPFIA4表达后，观察到CRC细胞增殖和迁移能力显著抑制。

实验结果表明，PPFIA4敲低后，SW480细胞在第5天和第7天增殖显著减少（P<0.05），HCT-116细胞从第3天开始增殖就显著减少（P<0.01）。伤口愈合实验也证实PPFIA4敲低显著抑制了细胞迁移能力。

研究还深入分析了两个免疫亚型的肿瘤微环境差异：

C2亚型在MAPK通路等典型通路以及免疫应答、PD1激活和补体激活等免疫通路中表现出显著差异。评分分析显示，C2的免疫评分（反映免疫细胞浸润）、基质评分（表明肿瘤微环境中的基质含量）和细胞溶解评分（量化细胞毒性T细胞活性）均较低。

免疫细胞浸润评估发现，除中性粒细胞外，12种免疫细胞类型（包括T细胞、CD8+ T细胞、细胞毒性淋巴细胞和各种髓系细胞）在C1中的丰度更高。

研究发现两个亚型之间存在显著的突变差异：

两个亚型均显示APC、TTN和TP53等高频率基因突变，但突变率不同。KRAS突变在C2样本中检出率为67%，而在C1中仅为39%；BRAF突变在C2中也更常见。与更强免疫反应相关的肿瘤突变负荷（TMB）在C1中更高。

研究人员进一步构建了免疫检查点抑制（ICI）评分，作为预后的生物标志物和免疫治疗反应的预测指标。研究发现，高ICI评分与较低的免疫和基质评分相关，而低ICI评分则与增加的免疫浸润相关。

Kaplan-Meier生存分析显示，高ICI评分患者的总生存期更好。这些发现表明我们的亚型分类可用于指导免疫治疗策略。

本研究通过对LNM-negative CRC进行免疫分型，提供了对这种早期结直肠癌免疫微环境的深入理解。研究发现不仅揭示了影响预后的关键因素，还通过Fuheng Biotechnology提供的细胞系验证了PPFIA4作为潜在治疗靶点的重要性。

这些发现为开发个性化免疫治疗策略提供了重要依据，有望改善早期结直肠癌患者的治疗选择和预后评估。特别值得一提的是，研究中使用的Fuheng Biotechnology (Shanghai, China)的SW480(FH0022)和HCT-116(FH0027)细胞系在实验验证阶段发挥了关键作用，确保了研究结果的可靠性和可重复性。

未来研究可进一步探索这些免疫亚型在更广泛CRC人群中的应用价值，以及PPFIA4作为治疗靶点的临床转化潜力，为结直肠癌精准治疗提供新选择。

参考文献：

Yuan W, Liu L. (2025) Immune subtyping of lymph node metastasis-negative colorectal cancer reveals biomarkers for prognosis and immunotherapy response. PLoS One 20(9):e0332915.