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容易生气的巨噬细胞——Raw264.7

大 大 的 问 号 ?



- 在培养过程中你是否遇到过细胞突然长出“小角”?这个到底是什么?

- 其实这个“小角”俗称细胞的“伪足”细胞分化导致的,虽然不影响细胞生长,但会影响到后期实验效果。那该如何避免它的发生,我们一起来研究一下。



培养条件DMEM(高糖)+10%FBS+1%P/S


首先观察下分化和不分化的生长形态是怎样的?

Raw264.7(未分化前)图1


图片

RAW264.7(分化后)图2   仅供参考


图1   为细胞正常形态呈不规则圆形,贴壁生长,未见触角

图2   可以清晰看见细胞长出长长的角,可见细胞已经分化


如何收起他的小脾气?

培养注意事项

01

该细胞传代时不需要用胰酶消化,长时间的胰酶消 化会使细胞分化,长出伪足,小脾气就冒出来啦!

02

传代时使用无菌细胞刮刀刮拭培养表面将细胞刮落,收集离心后重悬接种到新的培养瓶中。

03

传代比例,尽量使细胞密度高于30%

04

使用较好的血清来进行培养。



正确的传代步骤

01

无菌细胞刮刀刮拭培养表面将细胞刮落

02

将刮下来的细胞用15ml离心管离心收集

03

1000rpm 离心5分钟

04

去上清,用新鲜的完全培养基将细胞重悬

05

按比例接种到新的培养器皿中

小知识



RAW 264.7细胞系的起源

加利福尼亚索尔克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV(Abelson鼠科白血病病毒)诱发肿瘤的腹水中建立了RAW 264细胞系。他发现RAW 264可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖,并且能通过抗体依赖途径分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。RAW 264.7不分泌A-MuLV(但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清检测到病毒),对LPS非常敏感。该研究1978年发表在《CELL》杂志。


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