【培养细节】显微镜下的小黑点

细胞培养中经常会观察小黑点，随着细胞培养它们还会增多。数量过多时，还会影响细胞生长状态。但小黑点也是因各种原因产生的，只有找到问题原因才好对症下药。

原因：体外培养的细胞易受培养环境变换的影响，如更改培养的培养基、培养气相的改变、培养试剂质量不合格、长期不换液、 吹打细胞过于用力、细胞密度及微生物污染等。这些因素的改变可能会导致细胞凋亡，而细胞凋亡后可能会发生粘连聚成团块。

处理：使用PBS换液去除团块，将细胞培养环境调整至正常培养状态。

建议：

1.细胞生长需要空间，培养过程中要控制传代的时间，不能让细胞过密。

2.对培养细胞的培养基、血清等检查其质量是否过关。

3.非永生化细胞都有代数限制，购买细胞注意其代数，避免买到即将凋亡的细胞。

原因：血清可能会有的三种沉淀：絮状纤维蛋白沉淀物、磷酸钙沉淀物（观察似小黑点）、胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质的沉淀物。在热灭活血清、在 37℃ 下培养血清、反复冻融血清、γ 射线照射、长期储存在 2-8℃、在室温下放置时间过长的情况下都可能会使沉淀增多。

处理：血清的沉淀不影响细胞的生长，但如在经费充足的情况下建议更换血清。

建议：

1.尽量避免在热灭活血清、在 37℃ 下培养血清、反复冻融血清、γ 射线照射、长期储存在 2-8℃、在室温下放置时间过长的情况下使用血清。

2.在细胞没有标明需要使用灭活血清时，尽量不热灭活血清。

原因：黑胶虫的出现暂不明确，根据查询资料表示可能为生物污染、也可能是基因携带。

处理：如经费足够或黑胶虫污染严重，建议直接消杀丢弃；如细胞较为珍贵且污染较轻，可用黑胶虫清除剂清除。（有资料表示细胞与黑胶虫成反比，细胞越多，它越少，细胞越少它越多，只要细胞增殖大于黑胶虫，就可以防治。）

建议：

1.血清、培养基等培养试剂检查是否污染。

2.购买到细胞尽早培养，有问题及时跟商家联系。

原因：工作环境的污染；操作者本身的污染；已受污染的培养基、血清，或用来制备细胞的原始组织或器官的污染；污染支原体的细胞造成的交叉污染。

处理：对于非重要的细胞，将培养物与用过的培养基灭活后丢弃。也可以尝试用支原体清除剂、清洗纯化法、药物辅助加温处理、免疫反应清除法等方法处理细胞。

建议：

1.注意周围实验环境的清洁、保持无菌操作习惯。

2.使用正规的培养基、血清等培养试剂。