上海富衡 | 细胞“祛黑”记一：细胞培养过程中出现的“小黑点”是什么？

首先，我们要判断出现小黑点的原因。一般来说，小黑点出现的原因有以下几种可能：

那么，我们要如何区分这几种情况呢？我们可以根据以下几个方面进行分析。

1、观察培养基状态，是否出现浑浊？

正常状态的DMEM(左图)与污染的DMEM(右图)对比

细菌污染会导致培养基浑浊，此外细菌污染会使培养基PH突然降低，短期内颜色变黄，表明有大量酸性物质产生。

2、观察黑点状态，在培养基内是否会运动？

细菌污染(左图)与细胞分泌物(右图)的区别

杆状细菌往往在显微镜下呈现活跃的运动状态，而非仅仅随着溶液的波动而移动。细胞碎片或分泌物则一般静止不动，或者仅仅随着溶液的波动而移动。

3、观察细胞状态，细胞生长是否受到影响？

重点观察细胞形态是否变化，细胞增殖是否变慢，以及黑点是否会持续增多。

常见的杆状细菌污染，显微镜下会呈现运动活跃的杆状黑点，而且往往增殖迅速。
支原体污染不仅会使细胞增殖变慢，也可能会导致小黑点的出现。不过，由于支原体十分微小，一般光学显微镜下也不可见，可以使用支原体检测试剂盒进行检测确认。
黑胶虫污染也是一种比较难判断的污染。在细胞培养的时候，有时会在40倍显微镜下看到小黑点在动，小黑点有时呈点状，有时呈小的片状，运动形式为在原地振动（类似布朗运动），这种小黑点既不是细菌、霉菌，也不是支原体（用血平板培养，没有菌落出现），业内人士称其为“黑胶虫”。所以，对于黑胶虫污染的判断，更需要细胞培养者的经验。一般认为，黑胶虫污染会导致细胞增殖变慢，且培养瓶内小黑点会明显增多。