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上海富衡 | 细胞“祛黑”记二:遇到“分泌物多的细胞”,怎么办?


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在细胞培养过程中,可能会遇到这样一些细胞:细胞间隙或者培养液里,一直有一些“小黑点”的存在,这些小黑点没有自主运动,不会增殖,经过检测,也排除了支原体污染。


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这些小黑点是什么呢?

业内人士一般认为,它们是细胞分泌物和碎片形成杂质,有一些细胞由于分泌物比较多,比其他细胞更容易形成这种非生物类的杂质,也会显得背景有点“脏”。

那么对于这些分泌物较多的细胞,我们可以在采取什么措施改善这种情况呢?


  1. 期更换培养液,适当提高换液的频率,以清除细胞产生的代谢废物和过多的分泌物,保持培养环境的清洁和稳定。

  2. 于贴壁细胞,更换培养基时,弃去培养瓶中的旧培养基以后,可以使用无菌PBS清洗2~3次,再加入新的培养基继续培养。

  3. 对于悬浮细胞,可以在更换培养基,吸出所有细胞,置于离心管中,低速离心,让细胞沉降,然后小心吸去上清,再加入新的培养基继续培养,中间也可以使用无菌PBS清洗1~2次。对于一些比较脆弱的悬浮细胞,为了避免离心对细胞造成的机械损伤,可以采用静置0.5~1h的方式,替代离心。

  4. 调整细胞密度,以优化细胞的生长空间,避免细胞过于密集导致的营养竞争和分泌物积累。

  5. 添加适量的生长因子和激素,以促进细胞的生长和分泌活动。

  6. 另外,有些比较敏感的细胞,在培养环境发生改变的情况下,也可能会出现背景变脏的情况,这是由于细胞受环境影响,细胞代谢发生改变。这种情况下,就需要监控培养环境,保持适宜的温度、湿度和CO2浓度,以确保细胞在最佳条件下生长和分泌。



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富衡细胞库中典型的两种“分泌物较多的细胞”

01
分泌物较多的贴壁细胞:A-431(货号:FH0188)


人皮肤鳞癌细胞A-431,源自该细胞源自一位患有皮肤鳞状细胞癌的85岁女性。它具有以下特点:

  • 贴壁培养。

  • 该细胞在免疫抑制小鼠体内可成瘤,在琼脂上培养可形成克隆。

  • A-431也是一个超三倍体人细胞株。

  • A-431细胞高表达EGFR,有助于理解EGFR在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用,以及评估抗癌药物的疗效。

  • 该细胞系易于操作,适用于基因编辑、蛋白质组学分析和药物筛选,对癌症研究和药物开发具有重要价值。

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02
分泌物较多的悬浮细胞:NK-92(货号:FH1204)


NK-92细胞是一种来源于恶性非霍奇金淋巴瘤患者的外周血自然杀伤细胞,经过体外培养和扩增得到的细胞株。它具有以下特点:

  • 悬浮培养。

  • 表达典型的自然杀伤细胞标志,如CD56和CD16。

  • 具有较强的肿瘤细胞杀伤活性。

  • 可以用于研究恶性非霍奇金淋巴瘤的免疫学机制和治疗策略的开发。

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富衡细胞库中部分“分泌物较多的细胞”


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